P268S突变型NOD2/CARD15真核表达载体的构建及其体外表达

背景:NOD2/CARD15基因序列单核苷酸多态性(SNP)与欧美人群的克罗恩病(CD)明显相关,其中R702W、G908R和3020insC3个SNP位点与CD的相关性尤为显著。而日本、韩国以及我国香港和浙江地区的研究均未发现上述3个SNP的改变,但最近研究发现了可能与中国人CD相关的P268S突变。目的:构建P268S突变型NOD2/CARD15真核表达载体和体外转染体系,为研究突变型NOD2/CARD15的功能提供实验基础。方法:应用定点诱变技术构建P268S突变型NOD2/CARD15真核表达载体,以阳离子脂质体介导体外转染技术瞬时转染人胚肾细胞HEK293T,以蛋白质印迹法和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HEK293T细胞NOD2/CARD15的表达。结果:经克隆、酶切、测序证实获得P268S突变型NOD2/CARD15基因,突变载体转入HEK293T细胞后,NOD2/CARD15有效表达。结论:成功构建了P268S突变型NOD2/CARD15真核表达载体,阳离子脂质体是人胚肾细胞有效的体外转染体系。