转基因玉米中膦丝菌素乙酰转移酶双抗体夹心ELISA检测方法的建立

被引：6

作者：

刘志浩 ^{[1
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高丽丽 ^{[1
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王新桐 ^{[1
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孙佳芝 ^{[1
]}

杨正友 ^{[2
]}

柴同杰 ^{[1
]}

机构：

[1] 山东农业大学动物科技与动物医学院

[2] 山东农业大学生命科学学院

来源：

西北农林科技大学学报(自然科学版) | 2013年 / 11期

关键词：

PAT蛋白; 单克隆抗体; 双抗体夹心ELISA; Bt176;

D O I：

10.13207/j.cnki.jnwafu.2013.11.019

中图分类号：

S513 [玉米（玉蜀黍）];

学科分类号：

摘要：

【目的】以单克隆抗体(monoclonal antibody,mAbs)为基础,建立检测膦丝菌素乙酰转移酶(the phosphinothricin acetyltransferase,PAT)的双抗体夹心ELISA方法,为转基因玉米PAT蛋白的检测提供参考。【方法】由P3301质粒扩增出膦丝菌素乙酰转移酶基因(blalaphos resistance gene)bar,并与表达载体pET28a构建重组质粒,诱导表达产生外源性PAT蛋白;以纯化后的PAT蛋白为免疫原,制备mAbs,建立双抗体夹心ELISA方法,并与PCR检测方法进行比较,确定该方法的准确性和可靠性。【结果】应用mAbs 4D5和3E8成功建立了检测PAT蛋白的双抗体夹心ELISA方法,其有效检测范围为3.125～50ng/mL。采用该夹心ELISA方法对36份已知转基因背景的玉米样品进行了检测,根据阴阳性判定值OD450>0.210,检测出含PAT蛋白的Bt176阳性样品4份,以bar基因为检测目标利用传统PCR方法也检测出相同的Bt176样品4份,2种检测方法的符合率为100%。【结论】利用建立的双抗体夹心ELISA免疫学检测方法,可以对转基因玉米中的PAT蛋白进行准确、特异、有效的检测。

引用

页码：45 / 50

页数：6

共 13 条

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