人微小RNA-133a(miR-133a)重组腺病毒的构建和鉴定

被引：3

作者：

张斌 ^{[1
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单志新 ^{[2
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林秋雄 ^{[2
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周志凌 ^{[2
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邓春玉 ^{[2
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郭爱林 ^{[2
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符永恒 ^{[2
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谭虹虹 ^{[2
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余细勇 ^{[2
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机构：

[1] 广东省心血管病研究所

[2] 广东省人民医院医学研究中心

来源：

中国病理生理杂志 | 2007年 / 07期

基金：

广东省自然科学基金;

关键词：

微小RNA; 载体构建; 骨髓间质干细胞; 腺病毒;

D O I：

暂无

中图分类号：

Q78 [基因工程（遗传工程）];

学科分类号：

071007 [遗传学];

摘要：

目的:构建人miR-133a重组腺病毒,研究其在人骨髓间充质干细胞(hMSCs)中的表达。方法:从人基因组DNA中扩增包含miR-133a的PCR产物,并定向插入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV。将经pmeⅠ线性化的重组穿梭载体与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化感受态大肠杆菌BJ5183,通过同源重组获得重组腺病毒质粒rAd-mir-133a。将rAd-mir-133a在人胚肾293细胞(HEK293)中包装并扩增出miR-133a的重组腺病毒。将重组腺病毒感染hMSCs,利用RT-PCR和实时定量PCR分别检测初级miR-133a和成熟miR-133a的表达。结果:限制性内切酶分析和DNA测序结果显示,重组腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV-miR-133a构建正确。在HEK293细胞中成功包装并扩增出重组腺病毒rAd-miR-133a。rAd-miR-133a感染的hMSCs中初级miR-133a转录子和成熟miR-133a表达显著增强。结论:成功构建了人miR-133a重组腺病毒,并在hMSCs中高效表达出miR-133a,为进行miR-133a的功能研究创造条件。

引用

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页数：6