牛分枝杆菌抗原MPB70、MPB83和ESAT-6的融合表达及重组蛋白的初步应用附视频

被引：27

作者：

郭设平 ^{[1
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刘思国 ^{[1
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张秀华 ^{[2
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王春来 ^{[1
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宫强 ^{[1
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郭洋 ^{[2
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邵美丽 ^{[3
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机构：

[1] 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

[2] 沈阳农业大学

[3] 东北农业大学

来源：

畜牧兽医学报 | 2006年 / 07期

基金：

国家科技攻关计划;

关键词：

牛分枝杆菌; 融合表达; ELISA;

D O I：

暂无

中图分类号：

S852.61 [病原细菌];

学科分类号：

090601 ;

摘要：

应用PCR方法从牛分枝杆菌Vallee株基因组中扩增获得mpb70、mpb83和esat-6三个目的基因片段。采用重叠延伸剪接技术(splicing by overlap extension,SOE)获得融合基因mpb70-mpb83后,将mpb70-mpb83和esat-6串连于同一表达载体pET32a(+)中得到重组质粒pET70-83-E6。转化BL21(DE3)大肠杆菌感受态后,经IPTG诱导以可溶的形式表达融合蛋白。用Ni2+亲合层析的方法纯化该融合蛋白。Western blot分析显示:该融合蛋白能与抗牛分枝杆菌阳性血清发生特异性反应,而与牛副结核病阳性血清不反应。用该纯化蛋白初步建立了间接ELISA方法,并检测了117份临床血清样本(其中67份为PPD阳性牛血清),阳性率为39.32%(46/117)份,与PPD皮试诊断的符合率为82.05%(96/117)。

引用

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