黄病毒逆转录-聚合酶链反应检测技术的建立和应用

为了早期快速诊断黄病毒感染，在其ＮＳ１基因序列设计了一对通用引物，扩增序列长度为４１３ｂｐ；在登革病毒（ＤＥＮ）１，２，３，４型和乙型脑炎病毒（ＪＥＶ）设计了各型的内引物，扩增序列长度分别是ＤＥＮ１型为２６２ｂｐ，ＤＥＮ２型为１８９ｂｐ，ＤＥＮ３型为３９２ｂｐ，ＤＥＮ４型为９７ｂｐ，ＪＥＶ为３２３ｂｐ。应用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）成功地扩增了ＤＥＮ１－４型和ＪＥＶ基因部分片段，其扩增片段的大小与设计相符合。应用套式ＰＣＲ检测临床诊断为登革热的患者血清标本７８份，证实ＤＥＮ１型阳性１８份，ＤＥＮ２型阳性４８份，其中８份同时合并感染ＤＥＮ４型。采用套式ＰＣＲ检测临床诊断为乙型脑炎患者血标本４２份，证实乙型脑炎病毒感染者３５份。结果表明，该法能直接检测发病患者早期血标本中的病毒基因，并在２天内完成对黄病毒的鉴别诊断。