镉诱导蚯蚓金属硫蛋白的分离纯化及其溶液构象的研究

镉诱导蚯蚓（赤子爱胜，Ｅｉｓｅｎｉａｆｏｅｔｉｄａ）匀浆液经热沉淀，乙醇沉淀后，经凝胶过滤ＳｅｐｈａｃｒｙＳ－２００柱层析，得三个镉结合蛋白峰，分子量依次为４０，１７及９ｋＤ。这三个组份再分别经ＤＥＡＥＳｅｐｈａｒｏｓｅＦａｓｔＦｌｏｗ柱层析，分别得三、三、二个镉结合蛋白峰。根据光谱学特征、巯基含量及氨基酸组成等分析，认为凝胶过滤第二峰为金属硫蛋白（ＭＴ），其经ＤＥＡＥ柱层析所得三个峰为ＭＴ三个亚型。对蚯蚓ＭＴ三个亚型在不同ｐＨ条件下的紫外吸收（ＵＶ）、荧光发射（ＦＳ）、圆二色性（ＣＤ）及扫描隧道显微镜（ＳＴＭ）图象的测定研究结果表明：（１）蚯蚓ＭＴ各亚型在２５０ｎｍ左右均具有一个紫外吸收肩，为Ｃｄ—ＳＨ络合结构特征吸收，随ｐＨ下降而趋于消失。（２）ＭＴ各亚型在２８２ｎｍ激发下，荧光发射的最大波长（Ｐｍ）均在３４０ｎｍ左右。随着ｐＨ下降，Ｐｍ红移且量子产率减小。（３）ｐＨ２．０以上ＭＴ各亚型在２４７ｎｍ附近有一ＣＤ正吸收，２１０ｎｍ附近则有一ＣＤ负吸收。随着ｐＨ降低，在整个２００—３００ｎｍ区间上ＭＴ各亚型的［θ］值均趋负方向变化，当ｐＨ从２．０降至１．０时，则呈现负向骤变。（４）扫描隧道显微镜观察结果显示