幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白DNA疫苗的构建及其免疫保护作用

目的:构建携带幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白(Hp neutrophil-activating protein,Hp-NAP)基因(napA)活减毒鼠伤寒沙门菌重组DNA疫苗,初步观察其对慢性Hp感染的免疫保护作用。方法:应用基因工程技术扩增全长napA,测序并经同源性分析后,将其亚克隆入真核表达载体pIRES,鉴定正确后将重组质粒转化活减毒鼠伤寒沙门菌构建Hp-NAP口服DNA疫苗。口服Hp-SS1建立SS1长期感染小鼠模型,30周后随机均分为3组,每组各5只。治疗组予10 9 cfu／0.4 ml疫苗菌灌胃,1次／周×3周;2个对照组分别予等体积生理盐水或空白质粒。末次免疫4周后行快速尿素酶检测,ELISA测定血清抗体效价。结果:重组真核表达质粒pIRES-napA成功转化活减毒鼠伤寒沙门菌SL7207;所克隆napA与GenBank中SS1-napA核苷酸和蛋白质的同源性均>98％。免疫后4周治疗组75％(3／4)小鼠快速尿素酶检测阴性,对照组均阳性,差异显著(P<0.05);治疗组血清抗Hp-NAP抗体效价明显升高。结论:成功构建了具有较好免疫保护作用的Hp-NAP口服重组DNA疫苗,为进一步研制多价抗Hp核酸疫苗奠定了基础。