UPLC-Q-TOF-MS辨析清热除湿汤药效物质基础

目的:采用液相质谱联用技术表征并比较清热除湿汤4种提取物的化学信息,并将4种提取物化学信息与抗炎药效结果相结合,进行多元统计分析,辨析清热除湿汤中与抗炎药效作用直接相关的化合物组成。方法:利用超高效液相色谱与四极杆串联飞行时间质谱仪联用技术(UPLC-Q-TOF-MS)表征清热除湿汤4种提取物:(1)醇提部分+水提部分组,(2)醇提部分+水提醇沉后上清液组,(3)醇提部分+水提醇沉后沉淀组,(4)标准煎剂组的化学信息。结合以上4种提取物对二甲苯致小鼠耳肿胀的抑制作用结果,进行多元统计分析(主成分分析及正交偏最小二乘法-判别分析),锁定药效最佳组(1)与标准煎剂组(4)差异较大的色谱峰,根据一级准分子离子峰、二级特征性碎片的精确质量数结合对照品及文献数据,进行化合物鉴定归属。结果:主成分分析(PCA)能够将清热除湿汤4种提取物进行很好的分组聚类,并以组间距离体现组间差异大小,其中组(4)(标准煎剂)与其他3组差别最为显著,在第一主成分上得到显著区分;组(1)(醇提部分+水提部分组),组(2)(醇提部分+水提醇沉后上清液组)及组(3)(醇提部分+水提醇沉后沉淀组) 3组,在第二主成分上具有一定差异。正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)将药效佳组(1)与标准煎剂组(4)进行组间分析比较,锁定了11个对组间差异贡献大,且可信度高的色谱峰,并初步鉴定为龙胆苦苷,茵芋苷,黄芩苷,黄芩苷异构体,汉黄芩苷,5,6,7-三羟基-8-甲氧基黄酮-7-O-葡萄糖唐醛苷,5,6-二羟基-6,8,2',3'-四甲氧基黄酮,白杨素-6-C-阿拉伯糖-8-C-葡萄糖苷,大车前苷及甘草酸。结论:该研究以谱效结合的方式初步探讨并鉴定了与清热除湿汤抗炎药效相关的化合物组成,为筛选清热除湿汤提取纯化工艺及优化制剂处方提供物质基础方面的依据。