猪β-干扰素的原核表达及其对猪流行性腹泻病毒的抑制作用研究

被引:38
作者
曹瑞兵
包晶晶
周海霞
郑其升
周斌
陈溥言
机构
[1] 南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室,南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室,南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室,南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室,南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室,南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京,江苏南京,江苏南京,江苏南京,江苏南京,江苏南京
关键词
猪β干扰素; 原核表达; 猪流行性腹泻病毒;
D O I
暂无
中图分类号
S852.65 [家畜病毒学];
学科分类号
090507 [智慧养殖与动物生产学];
摘要
本研究通过PCR技术克隆了猪β干扰素全基因,设计引物亚克隆猪β干扰素成熟蛋白编码基因并对,5’端1个稀有密码子进行了大肠杆菌偏嗜性改造。构建了猪IFN-β原核单纯表达载体pRLC-poIFNβ,实现了poIFN-β在大肠杆菌中的表达,表达产物约占菌体总蛋白的17.3%。表达产物以包涵体形式存在,用含6mol/L盐酸胍的变性液溶解及含GSH-GSSG复性液复性处理,复性后的表达产物经凝胶层析纯化后,MDBK细胞-VSV病变抑制法测定结果表明,重组猪β干扰素具有良好的抗病毒活性,约为5.6x105U/mg。用重组猪β干扰素处理猪肾传代细胞PK-15后,细胞病变抑制法(CPE50)测定结果表明:重组猪β干扰素可显著抑制猪流行性腹泻病毒(PEDV)的感染。
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