大鼠骨髓EPC的体外培养和生物学特性鉴定

目的体外培养、诱导大鼠骨髓内皮祖细胞(EPC),观察EPC的生长特性,并进行鉴定。方法冲洗大鼠长骨骨髓,用密度梯度离心法收集单个核细胞层,观察细胞在碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导体系下生长情况并与未诱导组比较,对培养细胞进行免疫细胞化学检测。于培养3、7、14天采用流式细胞仪检测CD133+/Flk-1+双标记阳性细胞百分率。结果贴壁细胞呈现团簇样生长、线样排列特殊形态。免疫细胞化学检测贴壁细胞CD133、CD34、Flk-1、Ⅷ因子(vWF)呈阳性表达。流式细胞检测结果显示,各个时间点诱导组CD133+/Flk-1+双标记阳性细胞百分率明显高于未诱导组(P<0.01)。结论用密度梯度离心法在bFGF培养体系下可以获得较高纯度的EPC,该细胞具有内皮细胞的特性,经过体外诱导可以分化为内皮细胞。