基于CRISPR/Cas9技术的烟草NtDXR基因敲除及功能分析

被引：12

作者：

聂梦云

高军平

罗培

陈晓乐

易小慧

王根洪

夏庆友

机构：

[1] 家蚕基因组生物学国家重点实验室西南大学

来源：

烟草科技 | 2016年 / 49卷 / 06期

关键词：

CRISPR/Cas9; 烟草; 5-磷酸脱氧木酮糖还原异构酶; 荧光定量PCR; 基因敲除;

D O I：

10.16135/j.issn1002-0861.20160601

中图分类号：

S572 [烟草（菸草）];

学科分类号：

0901 ;

摘要：

为研究烟草5-磷酸脱氧木酮糖还原异构酶（1-Deoxy-D-xylulose-5-phosphate reductoisomerase,DXR）基因的表达模式和功能,从普通烟草（Nicotiana tabacum）品种红花大金元中克隆了NtDXR基因,并通过荧光定量PCR技术分析了NtDXR在红花大金元不同发育时期、不同组织中的表达模式。同时利用CRISPR/Cas9技术构建了NtDXR敲除载体,获得了DXR基因突变的植株。结果表明:NtDXR基因在花中的表达量最高,在雌蕊和叶中次之;利用CRISPR/Cas9系统定点敲除NtDXR基因后,检测目的基因靶位点序列发现有碱基的插入、缺失与置换,并且部分T0代转基因阳性植株呈现白化表型,暗示NtDXR基因在烟草叶绿素等色素合成过程中起重要作用,推测NtDXR基因的突变能阻断烟草质体色素的合成。

引用

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共 9 条

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