神经生长因子对神经干细胞分化及神经元轴突形成的影响

背景:将大量的神经干细胞定向诱导分化后的神经细胞能否与其他神经细胞建立功能联系是目前解决神经干细胞应用于临床的重要问题之一。目的:观察神经生长因子对体外培养的神经干细胞生长和分化的影响,以及神经生长因子对神经轴突形成和生长的作用。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-06/2008-12在中国医科大学设备处完成。材料:清洁级二三天龄新生SD雄性大鼠3只,神经生长因子为peprotech公司产品。方法:酶消化和机械分离法相结合体外分离培养新生鼠神经干细胞,传至第4代的细胞克隆团行巢蛋白免疫细胞化学染色观察,剩余细胞团用机械法分散,采用有限稀释法进行单克隆神经干细胞培养,加入完全培养基制成108L-1的单细胞悬液,分为2组滴入培养板,对照组加入10%FBS,诱导组加入10%FBS+50μg/L神经生长因子,培养5～7d。连续观察5个神经元特异烯醇化酶染色阳性且未与其他神经元发生连接的孤立神经元,求助于以神经元为圆心的同心圆,分别计数内径为37.5μm和75μm圆环内的突触数量,将两者均值视为神经元轴突数量,通过此同心圆测量最长轴突的长度。主要观察指标:通过巢蛋白、神经元特异烯醇化酶、胶质原纤维酸性蛋白免疫组化染色对培养细胞进行鉴定。检测神经元数量及轴突数量、长度。结果:所培养出的细胞团均为巢蛋白阳性,诱导分化后均可产生神经元特异烯醇化酶、胶质原纤维酸性蛋白阳性细胞。诱导分化第6天,诱导组神经元数量、单个神经元轴突数量、最长轴突长度均明显高于对照组(t=3.301,2.982,4.012,P均<0.01)。结论:神经生长因子可促进神经干细胞向神经元的分化,还可以增加由神经干细胞分化而来的神经元突起数量及长度。