酚/氯仿抽提法提取绵羊凝血块中基因组DNA(摘要)(英文)

[目的]对组织DNA提取方法进行改进,建立一种从绵羊凝血块中提取基因组DNA的方法。[方法]将绵羊凝血块用眼科剪剪碎,用组织DNA抽提液裂解细胞,用蛋白酶K消化后,经过酚/氯仿抽提,无水乙醇沉淀获得基因组DNA。用NanoDrop ND-1000微型分光光度计检测DNA浓度和纯度。用0.8%琼脂糖凝胶电泳检验基因组DNA的完整性。以绵羊微卫星位点BM203为扩增位点,分别以F:5′-GGGTGTGACATTTTGTTCCC-3′,R:5′-CTGCTCGCCACTAGTCCTTC-3′为上下游引物,进行PCR扩增试验。PCR产物用1.5%琼脂糖凝胶电泳检测。[结果]提取的DNA浓度为(159.90±0.70)ng/μl,A260/A280比值为1.80±0.01,分子完整,结果理想。以从凝血块中提取的DNA为模板,对绵羊BM203微卫星位点进行了PCR扩增,扩增产物条带整齐、明亮、特导性强,扩增效果好。[结论]该方法简单、实用,提取的DNA可满足后续相关研究对DNA质量的要求,值得推广借鉴。