高产纤维素酶绿色木霉基因工程菌的构建

被引:4
作者
胡耀辉
闫舟
于寒松
机构
[1] 吉林农业大学食品科学与工程学院
关键词
绿色木霉; CBHⅡ基因; 瑞氏木霉启动子; 外源基因表达系统;
D O I
10.13989/j.cnki.0517-6611.2010.25.045
中图分类号
Q789 [基因工程的应用];
学科分类号
摘要
[目的]构建CBHⅡ基因过量表达的绿色木霉工程菌。[方法]根据绿色木霉cDNA序列设计合成引物,PCR扩增CBHⅡ基因序列,将完整的目的基因与表达载体pCAMBIA1302连接,转入大肠杆菌DH5α中,获得重组质粒pCAMBIA1302-CBHⅠ。再将pCAM-BIA1302-CBHⅠ重组质粒与瑞氏木霉外切葡聚糖纤维二糖水解酶Ⅱ(CBHⅡ)PcbhⅡ启动子片段连接,将潮霉素磷酸转移酶(hyg)基因片段插入PcbhⅡ启动子下游,转入大肠杆菌DH5α中,获得重组表达质粒pCAMBIA1302-CBHⅡ。[结果]构建的重组表达质粒电转化后经SDS-PAGE电泳检测,绿色木霉纤维素酶CBHII基因在原宿主菌中成功过量表达,证实CBHⅡ基因在PcbhⅡ启动子控制下进行高效表达。[结论]为高产纤维素酶系的工业化菌株构建奠定基础。
引用
收藏
页码:13617 / 13619+13625 +13625
页数:4
相关论文
共 6 条
[1]   绿色木霉AS3.3711的葡聚糖内切酶Ⅲ基因的克隆与表达 [J].
刘北东 ;
杨谦 ;
周麒 ;
宋金柱 ;
陈佃福 ;
刘恒 .
环境科学, 2004, (05) :127-132
[2]   简便易行的丝状真菌染色体DNA提取法 [J].
吴志红 ;
汪天虹 ;
黄卫 ;
曲音波 .
菌物系统, 2001, (04) :575-577
[3]   纤维素科学及纤维素酶的研究进展 [J].
汪维云 ;
朱金华 ;
吴守一 .
江苏理工大学学报, 1998, (03) :20-28
[4]   绿色木霉纤维素酶CBHII基因的分子克隆 [J].
王建荣 ;
张曼夫 .
真菌学报, 1994, (03) :235-240
[5]  
精编分子生物学实验指南.[M].(美)F.M.奥斯伯等主编;马学军;舒跃龙等译校;.科学出版社.2005,
[6]  
产碱性纤维素酶菌株的选育及酶学特性研究.[D].杨永彬.福建师范大学.2004, 04