基因重组BDNF蛋白在大肠杆菌中的表达纯化与功能鉴定

目的构建脑源性神经营养因子(BDNF)基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达,以获取高产量、低成本、高纯度且具有生物学活性的BDNF蛋白。方法以人的全长BDNFcDNA为模板,用PCR方法扩增成熟区BDNF的cDNA,应用基因重组技术将人BDNFcDNA克隆到质粒pET-30a(+)中,进行限制性内切酶酶切分析和DNA测序鉴定。将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)LysS,经IPTG诱导表达后,用Ni-NTA亲和层析纯化获取蛋白,用SDS-PAGE和westernblot方法鉴别,噻唑蓝(MTT)法检测重组蛋白对PC12细胞增殖的影响。结果扩增出的人BDNFcDNA片段克隆进了原核表达载体,经酶切和核酸测序鉴定,得到了正确的重组质粒pET-BDNF,并在大肠杆菌中获得了表达。纯化后的蛋白经考马氏亮蓝染色呈单一条带;用抗BDNF的抗体进行westernblot分析证明目的蛋白获得了表达。基因重组BDNF蛋白能够促进PC12细胞增殖。结论本研究成功构建了表达基因重组人BDNF的原核表达载体,基因重组人BDNF蛋白在大肠杆菌中获得了表达和纯化,所获得的基因重组蛋白具有较好的生物学活性。