正交设计优化广藿香基因组SRAP扩增体系的研究

被引：5

作者：

吴友根 ^{[1
,2
]}

郭巧生 ^{[1
]}

何际婵 ^{[2
]}

林尤奋 ^{[3
]}

机构：

[1] 南京农业大学中药材研究所

[2] 中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所

[3] 热带园艺植物资源与遗传改良教育部重点实验室/海南大学园艺园林学院

来源：

江苏农业科学 | 2010年 / 04期

基金：

海南省自然科学基金;

关键词：

广藿香; SRAP标记; 正交试验; 体系优化;

D O I：

10.15889/j.issn.1002-1302.2010.04.066

中图分类号：

S567.239.01 [];

学科分类号：

1008 ;

摘要：

以改良CTAB法提取的广藿香叶片DNA为模板,采用正交试验设计,从Mg2+、dNTP、引物浓度和DNA聚合酶4因素3水平,对SRAP扩增效果进行研究,比较不同模板DNA浓度对PCR扩增的影响,确立适合广藿香SRAP-PCR反应的最佳体系。利用SRAP-PCR优化体系对引物进行了全面筛选。结果表明:各因素不同水平浓度对PCR反应结果均有显著影响,总体积20μL的SRAP-PCR优化反应体系中含有:2μL 10×buffer、20 ng模板DNA、1.5 mmol/L Mg2+、250μmol/L dNTP、0.3μmol/L Primer、TaqDNA聚合酶1.5 U。运用该体系对部分广藿香单株进行检验,证明该体系稳定可靠;以此体系为基础从90对引物中共筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的SRAP引物18对。

引用

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