16s～23s rDNA间隔区序列RFLP分析在分枝杆菌分类鉴定中的应用

目的：通过对分枝杆菌１６ｓ～２３ｓｒＤＮＡ间隔区序列ＤＮＡＰＣＲ扩增和限制性酶切分析，评价其在分枝杆菌分类鉴定中的价值。方法：对２１种分枝杆菌和９种亲缘关系较远的非分枝杆菌和４种亲缘关系较近的非分枝杆菌的１６ｓ－２３ｓｒＤＮＡ间隔区序列ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增并对扩增产物进行限制性内切酶ＨａｅⅢ．ＭｓｐＩ消化反应，分析不同菌种扩增片段及其限制性片段长度多态性的差异。结果：ＰＣＲ扩增结果显示：分枝杆菌一般扩增出１～２带，非分支杆菌一般有１～３条带。８０％的缓慢生长分枝杆菌扩增片段集中在３４０～４００ｂｐ，快速生长分枝杆菌扩增片段集中在４７０～５７５ｂｐ。单从扩增产物的琼脂糖凝胶电泳只能鉴定４２％的受试菌种。酶切结果显示：３种分枝杆菌酶切图谱没有区别，大部分分枝杆菌的酶切图谱彼此不同，而大部分非分枝杆菌不能被ＨａｅⅢ．ＭＳＰⅠ消化。结论：说明１６ｓ～２３ｓｒＤＮＡ间隔区序列ＤＮＡＰＣＲ扩增和限制性片段长度多态性分析是分枝杆菌菌种分类鉴定的一种快速、有效的方法。