尿酸氧化酶的表达纯化及活性形式鉴定

被引：2

作者：

吴伟立

李彦英

苗林

徐金森

方宏清

陈惠鹏

机构：

[1] 军事医学科学院生物工程研究所

[2] 厦门大学肿瘤细胞教育部重点实验室

[3] 军事医学科学院生物工程研究所北京

[4] 厦门

[5] 北京

来源：

军事医学科学院院刊 | 2005年 / 02期

关键词：

尿酸氧化酶; 重组蛋白质类; 大肠杆菌; 共价交联; 聚合酶链反应;

D O I：

暂无

中图分类号：

Q814 [酶工程];

学科分类号：

082203 ;

摘要：

目的:在大肠杆菌内表达具有活性的黄曲霉尿酸氧化酶。方法:用重叠PCR从黄曲霉(Aspergillusflavus)3.1398中钓取了尿酸氧化酶(urateoxidase,UO,EC1.7.3.3)基因,克隆到原核表达载体pET22b中,转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选到高表达的重组转化子菌株。经乳糖诱导目的蛋白表达,阴离子交换柱纯化,获得纯品。SDS PAGE分析样品纯度。用尿酸缓冲液测定酶活性,用戊二醛交联结合质谱法测定相对分子质量。结果:目的蛋白为胞内可溶性表达,表达量达菌体总蛋白的35%,纯化后的样品纯度达99%,其酶比活力可达35U/mg。经质谱测定重组UO单体的相对分子质量为34×103。交联后相对分子质量为160×103。结论:黄曲霉尿酸氧化酶可在大肠杆菌中可溶表达,并具有活性,其活性形式为四聚体。

引用

页码：124 / 126+131 +131

页数：4

共 3 条

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Macfarlane, RJ ;

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[2] Acute tumor lysis syndrome in solid tumors - a case report and review of the literature [J].

Baeksgaard, L ;

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[3]

Acute tumor lysis syndrome in solid tumors -a case report and review of the literature .2 Baeksgaard L,Sorensen JB. Cancer Chemother Pharmacol . 2003

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