淫羊藿苷对胶原支架中软骨细胞生长及胞外基质分泌的影响

目的:研究淫羊藿苷(icariin,ICA)对体外二维及三维培养条件下家兔关节软骨细胞增殖、形态及胞外基质分泌的影响,以期为淫羊藿苷应用于软骨组织修复提供实验基础。方法:分离、培养新生家兔关节软骨细胞;制备含5×10-2mg/ml终浓度ICA的胶原膜,与家兔关节软骨细胞进行二维共培养,观察细胞生长情况,MTT法检测ICA对细胞增殖的影响;制备含6.8×10-4mg/ml终浓度ICA的胶原水凝胶三维支架,激光共聚焦显微镜观察ICA对支架中家兔软骨细胞生长形态的影响,HE及甲苯胺蓝染色定性观察ICA对细胞胞外基质分泌的影响,定量测定糖胺聚糖(glycosaminoglycans,GAG)及细胞总DNA比值,以考察ICA对主要胞外基质GAG分泌的影响。结果:ICA对家兔软骨细胞具有良好的生物相容性,且在6d可促进其增殖;含ICA的胶原水凝胶支架中的家兔软骨细胞增殖较快且表型维持更好,更多细胞趋向于成簇生长,且具有更高的GAG\DNA比值,提示ICA可促进软骨细胞胞外基质的分泌,从而有助于软骨细胞的存活及向组织的转化。结论:ICA对软骨细胞具有良好的生物相容性,可维持细胞表型,促进细胞胞外基质分泌,有助于细胞向组织的演进,可望成为软骨组织工程安全有效的促进剂。