紫花苜蓿ISSR-PCR反应体系的建立与优化

通过优化影响紫花苜蓿（Medicago sativa L.）ISSR-PCR的主要参数,建立适于紫花苜蓿的ISSR反应体系和扩增程序。在20μL体系中各反应物的最适含量为:15 ng模板DNA,0.2 mmol/L dNTP,0.4μmol/L ISSR引物,0.8 U Taq DNA聚合酶,2μL 10×PCR Buffer,1.5 mmol/L MgCl2,2.5%去离子甲酰胺。PCR扩增程序为:94℃预变性4 min,94℃变性30 s,62℃（62℃58℃）退火45 s,72℃延伸1 min 45 s,共11个循环,每个循环退火温度降1℃;94℃变性30 s,52℃（52℃48℃）退火45 s,72℃延伸1 min 45 s,共24个循环;72℃延伸5 min,25℃保温。