牛视网膜微血管内皮细胞和周细胞的体外培养

目的　探讨牛视网膜微血管内皮细胞 (BREC)和周细胞 (BRP)的体外选择性培养方法。　方法　结合视网膜微血管的消化分离 ,采用含 10 %人血清、10 0 μg/ ml肝素的 Dulbecco改良 Eagle培养基(DMEM)和含 2 0 %胎牛血清的 DMEM培养基分别选择性培养 BREC和 BRP。通过荧光显微镜观察乙酰化低密度脂蛋白 (Dil- Ac- L DL )吞噬情况 ,应用 Von Willebrand因子抗体通过免疫组织化学方法鉴定BREC,并通过α-平滑肌肌动蛋白抗体免疫组织化学鉴定 BRP。结果　通过选择性培养获得的 BREC和BRP的纯度达到 98%以上 ,并能连续传代。BREC早期似小鲤鱼状聚集在微血管碎片周围 ,呈片状鹅卵石样单层生长 ,存在接触性抑制 ;BRP多散布在距血管碎片稍远处 ,形状不规则 ,呈无接触性抑制生长。BREC可吞噬 Dil- Ac- L DL,细胞浆内有荧光表达 ;消化传代后 ,BREC中 Von Willebrand因子表达阳性 ,而 α-平滑肌肌动蛋白表达阴性 ;BRP的α-平滑肌肌动蛋白表达阳性 ,而 Von Willebrand因子表达阴性。　结论　选择性培养基的应用和培养皿的处理可分别获得较高纯度的 BREC和 BRP,简单且具有良好的重复性 ,无需额外步骤来去除 BREC中混杂的 BRP。