多重荧光定量PCR方法鉴定布鲁氏菌属及牛羊种布鲁氏菌研究

被引：28

作者：

刘志国 ^{[1
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罗成旺 ^{[2
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张利 ^{[2
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姜海 ^{[2
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赵鸿雁 ^{[2
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朴东日 ^{[2
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田国忠 ^{[2
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崔步云 ^{[2
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机构：

[1] 内蒙古乌兰察布市地方病防治中心

[2] 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所

[3] 内蒙古农业大学

来源：

中国人兽共患病学报 | 2012年 / 28卷 / 09期

关键词：

布鲁氏菌; 荧光定量聚合酶链式反应; 鉴定; 评价;

D O I：

暂无

中图分类号：

S855.12 [];

学科分类号：

0906 ;

摘要：

目的利用多重实时荧光PCR技术,建立快速鉴定布鲁氏菌的方法。方法根据布鲁氏菌特异性基因BCSP31,AlkB/IS711和BMEI1162/IS711的部分片段作为靶基因,分别设计探针引物,将扩增产物连接到PUCm18-T载体上,制备标准品及标准曲线,确定此方法的灵敏度。利用布鲁氏菌的其他生物型菌株和同源性较近的致病菌(汉赛巴尔通体、霍乱弧菌、土拉弗朗西斯菌、大肠杆菌O157∶H7、大肠杆菌O∶16、小肠结肠炎耶尔森菌O∶9、沙门氏菌N群血清型、嗜麦芽假单胞菌)验证所建立方法的特异性。通过布鲁氏菌标准菌株建立方法,优化体系后扩增97株地方株进行验证。结果应用多重Taq-Man荧光PCR技术检测布鲁氏菌结果显示,布鲁氏菌属、牛种布鲁氏菌和羊种布鲁氏菌有各自的荧光信号,而与其同源性较高的致病菌均未见荧光信号;由标准曲线可知该方法的单重和多重荧光PCR最低检测下限均约为102copy/μL(13～24fg/μL),是常规PCR灵敏度的100倍。结论建立的方法有灵敏度高、快速易操作等优点,可用于布鲁氏菌快速鉴定,并同时确定是否为牛种或羊种布鲁氏菌。

引用

页码：869 / 874

页数：6

共 3 条

[1] 应用PCR方法快速检测布鲁氏菌核酸的研究进展 [J].

刘志国 ;

张利 ;

崔步云 ;

侯勇跃 ;

胡剑飞 .

疾病监测, 2010, 25 (09) :746-751

[2]

Real-time detection of Brucella abortus, Brucella melitensis and Brucella suis[J] . R. Redkar,S. Rose,B. Bricker,V. DelVecchio.Molecular and Cellular Probes . 2001 (1)

[3]

荧光定量PCR方法应用于布氏菌检测研究概述〔J〕. 张利,崔步云,莫内. 中国地方病学杂志 . 2012

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