RORα miRNA转染对DADS抑制胶质瘤U251细胞增殖的影响

背景与目的:维甲酸相关孤核受体α(retinoid acid receptor related orphan receptorα,RORα)可能参与肿瘤的调控。本实验室前期研究发现,二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)可抑制人胶质瘤U251细胞增殖,其抑制增殖作用可能与诱导RORα蛋白表达上调有关。为了明确RORα在DADS抑制人胶质瘤细胞增殖中的作用,本研究采用miRNA干扰技术抑制RORα表达,观察其对DADS抑制U251细胞增殖的影响。方法:首先将RORαmiRNA转染人胶质瘤U251细胞,运用Western blot检测转染前后RORα蛋白表达情况。实验分为未转染组、脂质体转染组和RORαmiRNA转染组及分别经30 mg/L DADS处理后的3组,共6组。MTT法检测RORα表达下调对DADS抑制胶质瘤U251细胞增殖的影响。结果:Western blot结果显示,转染RORαmiRNA细胞的RORα蛋白表达(0.09±0.05)明显低于未转染组(0.81±0.11)和脂质体转染组(0.89±0.15),其蛋白表达下调了89.5%(P<0.05)。MTT结果显示,U251细胞增殖活性在RORαmiRNA转染后48 h A570值为(0.98±0.15),高于未转染组(0.47±0.11)和脂质体转染组(0.45±0.10)(P<0.05),其增殖率高达108.5%。并且RORαmiRNA转染削弱了DADS对U251细胞的增殖抑制作用,转染RORαmiRNA细胞加入DADS后的细胞增殖率(A570值为0.69±0.20)明显高于DADS处理的未转染组(0.28±0.13)和脂质体转染组(0.25±0.12)(P<0.05),其抑制率由40.4%下降为29.6%。结论:miRNA干扰RORα表达可促进U251细胞增殖,并且削弱了DADS对U251细胞的增殖抑制作用,说明RORα参与了DADS抗胶质瘤U251细胞增殖的作用。