饮用水中大肠埃希菌富集和DNA提取方法优化

目的建立一种灵敏、可靠、快速对水中大肠埃希菌富集和DNA提取的最佳方法组合,以便应用TaqMan探针实时荧光PCR技术进行定量检测。方法膜过滤洗脱环节,采用3种不同的方法进行富集洗脱,通过平板计数法比较各方法富集洗脱效果;DNA提取环节,采用4种方法进行DNA提取。所得DNA进行实时荧光PCR扩增,定量检测DNA拷贝数,比较各方法的DNA提取效率;并采用最优的方法组合,对模拟水样进行膜过滤和DNA提取,考察全过程的回收率和灵敏度。结果采用加表皮葡萄球菌过滤+漩涡混合器+玻璃棒刮擦洗脱方法 （C法）,洗脱效率能达到75%93%;TritonX-100法和磁珠法的线性范围达到6个数量级稀释度（100～10-5）,r2分别为0.998和0.999,然而,TritonX-100法更省时,更简便,经济性更好。采用该最优的方法组合,其全过程的回收率为79.7%104.0%且灵敏度达到1 cfu/ml。结论 C法+Triton-100法组合可以快速、准确、经济地对饮用水中大肠埃希菌进行富集和DNA提取。