金丝桃苷对耐长春新碱结肠癌HCT8/VCR细胞耐药逆转作用

目的:探讨金丝桃苷对耐长春新碱结肠癌HCT8/VCR细胞的耐药逆转作用及其可能的作用机制。方法:分别以不同质量浓度(2.5～80 mg·L-1)的金丝桃苷及不同质量浓度(1.25～40 mg·L-1)的长春新碱作用于体外培养的HCT8和HCT8/VCR细胞48 h,采用噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞生长抑制率,计算各组细胞金丝桃苷和长春新碱的半数抑制浓度(IC50)及金丝桃苷抑制率为5%的药物浓度;采用非毒性剂量金丝桃苷分别与不同质量浓度(1.25～40 mg·L-1)的长春新碱联合作用HCT8/VCR细胞,检测长春新碱的IC50,计算逆转倍数;采用流式细胞仪检测细胞凋亡率及线粒体膜电位变化,比色法检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3,Caspase-9蛋白活性的变化。结果:金丝桃苷非细胞毒性剂量为0.82mg·L-1。0.82 mg·L-1金丝桃苷可使长春新碱对HCT8/VCR细胞的IC50从65.97 mg·L-1下降至9.94 mg·L-1,逆转倍数为6.63;与单独用长春新碱组比较,长春新碱与金丝桃苷联合用药组细胞凋亡率,Caspase-3,Caspase-9蛋白活性均显著提高(P<0.01)。线粒体膜电位检测发现,与单独用长春新碱组及金丝桃苷组比较,长春新碱与金丝桃苷联合用药组低荧光强度相对细胞数所占比率显著提高(P<0.01)。结论:长春新碱与金丝桃苷联合应用后可增强Caspase-3,Caspase-9蛋白活性,降低线粒体膜电位,提高HCT8/VCR细胞的凋亡率,从而产生耐药逆转作用。