三核苷酸重复序列PCR扩增中影子带的产生及其消除的方法

目的为了消除ＰＣＲ扩增三核苷酸重复序列时产生的影子带。方法以人类强直性肌营养不良致病基因－肌张力蛋白激酶基因（ｍｙｏｔｏｎｉｎｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅｇｅｎｅ，ＭＴ－ＰＫ）３′端非翻译区中的ＣＴＧ重复序列为例，主要比较了ＰＣＲ反应中单独使用ＴａｑＤＮＡ聚合酶和使用Ｔａｑ＋Ｐｗｏ混合的ＤＮＡ聚合酶对影子带产生的影响。结果实验表明ＰＣＲ反应中单独使用ＴａｑＤＮＡ聚合酶时，其ＰＣＲ产物经ＰＡＧＥ电泳，银染显色后常有影子带形成，而向ＴａｑＤＮＡ聚合酶中加入具有３′－５′外切酶活性的ＰｗｏＤＮＡ聚合酶则可完全消除影子带。结论本实验结果表明影子带产生于ＰＣＲ过程本身，而比ＴａｑＤＮＡ聚合酶具有更高加工性的组合酶则有可能消除或减弱影子带。