β分泌酶抑制剂体外筛选模型的构建与验证

被引：1

作者：

赵彬 ^{[1
]}

杨红军 ^{[2
]}

赵晶 ^{[1
]}

机构：

[1] 成都军区昆明总医院医学实验科

[2] 昆明医学院第一附属医院

来源：

中国药理学通报 | 2006年 / 01期

关键词：

β分泌酶; 筛选模型; 阿尔采末病; ELISA;

D O I：

暂无

中图分类号：

R965.1 [药物筛选和实验模型];

学科分类号：

100706 [药理学];

摘要：

目的构建β分泌酶抑制剂筛选模型用于治疗阿尔采末病药物筛选。方法克隆人β分泌酶基因,并在大肠杆菌中表达,经纯化、复性后获得重组蛋白。以重组β淀粉样肽融合蛋白为底物,体外建立酶学反应。酶切反应液用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,或将其包被金属螯和酶标板,用抗β淀粉样肽抗体行ELISA检测。结果用RT-PCR法克隆了人β分泌酶基因,构建入表达载体,诱导表达后获得高效表达。建立体外酶学反应,用ELISA和SDS-PAGE检测,二者检测结果一致,且用所构建方法测得阳性抑制剂的IC50值与文献报道吻合。对77种用于老年痴呆治疗的中草药提取物进行筛选,仅发现有17种显示微弱的β分泌酶抑制活性。结论成功构建了β分泌酶抑制剂筛选模型并用于中草药提取物活性筛选。

引用

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