葛根芩连汤中总生物碱体外抗轮状病毒作用实验研究

目的探讨葛根芩连汤中有效部位总生物碱类体外干预对人轮状病毒(rotavirus,RV)的药理作用。方法分离自临床RV患者粪便的RV,采用乙醇加热回流法提取葛根芩连汤方剂原4味药材中总生物碱,采用大孔树脂吸附法进行纯化,采用紫外分光光度计在350nm处测定总生物碱吸光度值(optical density,OD),绘制标准曲线,计算葛根芩连汤中总生物碱浓度。在恒河猴肾细胞(MA104)培养液中分别加入总生物碱0.32、0.16、0.08、0.04、0.02、0.01、0g/L,继续培养72h后采用MTT法检测细胞存活率。将MA104细胞分为药物处理组(64、32、16、8、4、2mg/L系列浓度组)、病毒对照组和正常对照组,其中药物处理组再分为药物处理1组、药物处理2组和药物处理3组。药物处理1组采用各浓度总生物碱与RV作用后再接种于MA104细胞,药物处理2组采用各浓度总生物碱与MA104细胞作用后再接种RV,药物处理3组采用RV先接种于MA104细胞再加各浓度总生物碱。正常对照组不加药物且不接种RV;病毒对照组接种RV但不加药物。采用MTT法检测各组细胞存活率、病毒抑制率及细胞半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50),采用治疗指数(treatment index,TI)评价不同浓度总生物碱对轮状病毒的抑制作用。结果乙醇加热回流法提取全方有效部位的总生物碱含量为10%;总生物碱致MA104细胞的半数存活浓度为0.09g/L;药物处理1组各总生物碱浓度下和病毒对照组细胞OD值明显低于正常对照组(P<0.05),药物处理1组各总生物碱浓度下与病毒对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);药物处理2组随总生物碱浓度增加,病毒抑制率增加,呈剂量-效应关系(Z=6.235,P=0.000),IC50=0.025g/L,TI=3.661;药物处理3组随总生物碱浓度增加,病毒抑制率明显增加,存在剂量-效应关系(Z=-4.833,P=0.000),IC50=0.005g/L,TI=17.304;药物处理3组TI值明显高于药物处理2组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论葛根芩连汤中有效部位总生物碱对人RV吸附宿主细胞有一定干预作用,但主要通过抑制RV在恒河猴胚胎肾细胞内生物合成过程发挥体外抗RV作用。