利用正交设计优化烟草SRAP反应体系

被引：30

作者：

陈万胜

王元英

罗成刚

杨爱国

蒋彩虹

范静苑

机构：

[1] 中国农业科学院烟草研究所

来源：

分子植物育种 | 2008年 / 01期

关键词：

烟草; SRAP; 正交设计; 优化;

D O I：

暂无

中图分类号：

S572 [烟草（菸草）]; Q943.2 [植物基因工程];

学科分类号：

0901 ; 071007 ; 090102 ;

摘要：

利用正交设计L16(45)对烟草SRAP-PCR反应体系的五因素(Taq酶,Mg2+,模板DNA,dNTP,引物)在四个水平上进行优化试验,PCR结果用统计软件SPSSV13.0分析,得出如下结论:各因素的不同水平对PCR反应结果都有显著的影响,其中Taq酶量影响最大;筛选出各反应因素的最佳水平,建立烟草SRAP-PCR反应的最佳体系(25μL)为:Taq酶1.0U,Mg2+1.5mmol/L,模板DNA30.00￣120.00ng,dNTP0.1mmol/L,引物0.40μmol/L。最后,应用烟草SRAP-PCR最佳反应体系对PCR扩增程序中的退火温度及循环次数进行了筛选,得出SRAP-PCR扩增以52℃退火温度、35个循环次数为最佳。这一优化系统的建立为今后利用SRAP标记技术对烟草进行基础研究提供了一个标准化的程序。

引用

页码：177 / 182

页数：6

共 6 条

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