苦荞SSR-PCR反应体系的优化及引物筛选

被引：10

作者：

王耀文 ^{[1
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夏楠 ^{[1
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韩瑞霞 ^{[1
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李艳琴 ^{[1
]}

王安虎 ^{[2
]}

蔡光泽 ^{[2
]}

机构：

[1] 山西大学生物技术研究所化学生物学与分子工程教育部重点实验室

[2] 西昌学院

来源：

贵州农业科学 | 2011年 / 39卷 / 04期

关键词：

苦荞; SSR-PCR; 交互正交设计; 引物筛选;

D O I：

暂无

中图分类号：

S517 [荞麦];

学科分类号：

摘要：

为了保证SSR-PCR的重复性,快速找到最优的水平组合,采用交互正交设计L27(313)对苦荞SSR-PCR反应体系进行了5因素(Mg2+、dNTP、Taq酶、模板DNA和引物)3水平优化试验,并对148对SSR引物进行了筛选。结果表明:5个单因素和2个交互作用(Mg2+×dNTP、Mg2+×Taq酶)对苦荞SSR-PCR均有极显著影响;最佳反应体系为:20μL总体积,Mg2+1 mmol/L,dNTP 0.3 mmol/L,Taq酶1.5 U,模板DNA30 ng,引物0.25μmol/L,10×buffer 2μL。运用该体系对7份苦荞材料进行扩增,电泳结果显示,扩增条带清晰,重复性好。利用148对SSR引物对滇宁一号、九江苦荞、野苦荞进行扩增,选出具有多态性的引物26对,可用于苦荞遗传多样性分析及遗传图谱构建。

引用

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共 11 条

[1] 鸭茅杂交种的SSR分子标记鉴定及其遗传变异分析 [J].