靶向克隆法构建NY-ESO-1基因的原核表达载体

被引：1

作者：

俞远东 ^{[1
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徐少勇 ^{[1
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王斌 ^{[1
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王家宁 ^{[2
]}

黄永章 ^{[2
]}

机构：

[1] 郧阳医学院附属人民医院肿瘤科消化内科

[2] 郧阳医学院附属人民医院肿瘤科临床医学研究所

来源：

武汉大学学报(医学版) | 2009年 / 30卷 / 02期

关键词：

NY-ESO-1; 靶向克隆; 原核表达;

D O I：

10.14188/j.1671-8852.2009.02.002

中图分类号：

Q784 [基因的重组];

学科分类号：

摘要：

目的:利用PCR产物靶向克隆法构建人癌-睾丸抗原NY-ESO-1的原核表达载体。方法:从人新鲜的食管癌组织中提取总RNA,通过RT-PCR技术扩增NY-ES0-1基因3′端的340bp片段,采用靶向克隆法将目的基因插入到原核表达载体pET-15b中,得到重组表达质粒pET-15b-NY-ESO-1,经过筛选,挑选出阳性克隆进行XhoⅠ和BamHⅠ双酶切图谱分析、PCR检测和扩增产物核苷酸序列分析等,鉴定所构建的原核表达载体。结果:扩增得到NY-ESO-1基因片段,经测序证实与GenBank公布的序列一致,重组的质粒经过PCR,酶切鉴定获得了一个大小为340bp的特征性片段,证明重组质粒中已成功的插入了目的基因NY-ESO-1。结论:靶向克隆法可快速、高效地构建人NY-ESO-1基因的原核表达载体,为制备pET-15b-NY-ESO-1融合蛋白奠定了基础。

引用

页码：209 / 211+215+282 +215

页数：5

共 4 条

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