淀粉液化芽孢杆菌β-1,3-1,4葡聚糖酶基因的克隆和表达

被引：9

作者：

吕文平

许梓荣

李卫芬

孙建义

韩晋辉

机构：

[1] 浙江大学饲料科学研究所教育部动物分子营养重点实验室

[2] 浙江大学饲料科学研究所教育部动物分子营养重点实验室浙江杭州

[3] 浙江杭州

来源：

中国兽医学报 | 2005年 / 03期

基金：

高等学校骨干教师资助计划;

关键词：

β-1,3-1,4葡聚糖酶; 淀粉液化芽孢杆菌; 克隆; 大肠杆菌; 表达;

D O I：

10.16303/j.cnki.1005-4545.2005.03.012

中图分类号：

Q785 [转化及克隆];

学科分类号：

071007 ; 0836 ; 090102 ;

摘要：

提取淀粉液化芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)基因组,通过PCR克隆了该菌的β-1,3-1,4葡聚糖酶基因全长。结果显示,该基因全长843bp,ORF为717bp,编码239个氨基酸,计算相对分子质量为26800,等电点为6.07。经Blast分析,该序列与基因库中的淀粉液化芽孢杆菌(M15674)同源性最高(97%)。该基因已被GenBank接受(AY205562.1)。用BamH和Xho双酶切目的片段和表达载体pET-30a(+)后相连接,构建了重组表达载体pET-amy,并导入BL21细菌中表达,酶学特性表明SDS-PAGE电泳在26000左右有表达蛋白带,该工程菌总酶活达90.74U/mL,是出发菌的3倍,最适温度在60℃左右,pH值在4～10之间。该工程菌可作为酶活高的理想材料,用以构建耐热性好和酶活高的杂合基因工程菌。

引用

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