胰蛋白酶与DNA相互作用的共振瑞利散射光谱及其分析应用研究

当胰蛋白酶与鲱鱼精DNA(hsDNA)、鲑鱼精DNA(sDNA)以及小牛胸腺DNA(ctDNA)之间发生相互作用时,共振瑞利散射(RRS)会显著增强,并产生新的RRS光谱.三者有近似的光谱特征,其最大RRS峰分别位于307nm(hsDNA和sDNA体系)和290nm处(ctDNA体系),另一散射峰位于350nm处,其散射强度(ΔI)与DNA或者胰蛋白酶的浓度成正比,因此可用于蛋白质和DNA的相互测定.当用胰蛋白酶测定DNA时,hsDNA,sDNA和ctDNA的检测范围分别为1.4×10-3～2.3,2.1×10-3～2.5和3.5×10-3～1.9μg/mL(ctDNA),它们的检出限分别为0.4,0.7和1.1ng/mL.当用hsDNA测定胰蛋白酶时,其线性范围为0.1～30.0μg/mL,检出限为39.0ng/mL.研究了最佳的反应条件、影响因素和结合产物的化学性质,考察了胰蛋白酶与DNA的结合比,推测了它们的结合方式,并以胰蛋白酶作RRS探针,发展了一种高灵敏、简便和快速测定痕量DNA的新方法.