兔关节软骨细胞的体外培养及鉴定

目的观察并鉴定体外单层培养的兔关节软骨细胞,分析其生物学特性。方法取3周龄健康新西兰兔双侧膝关节及股骨头软骨,以机械分离与酶阶段消化分离相结合的方法获取软骨细胞,以DMEM高糖型培养基培养,待细胞达80%90%融合时,以胰蛋白酶结合EDTA消化传代。逐日于倒置显微镜下观察和比较细胞形态,以四唑盐比色法绘制细胞生长曲线,分析细胞分化与生长能力,并采用组织学染色和ELISA的方法鉴定软骨细胞。结果原代培养的兔关节软骨细胞约48～72 h贴壁,细胞形态多为小的梭形、纺锤形或三角形。传代细胞贴壁时间缩短,随传代次数增加,细胞形态逐渐向长梭形发展,而第1～3代细胞的胞形、生长与分化无显著变化。生长曲线显示,软骨细胞传代后经历典型的潜伏期、对数生长期和停滞期。H.E.染色、番红O染色及甲苯氨蓝染色细胞核被染成相应的蓝紫色、红色和蓝色,Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色,细胞质被染成棕黄色,细胞核基本不着色。结论成功进行了兔关节软骨细胞的体外培养,并发现体外单层培养的兔关节软骨细胞有去分化的趋势,而其第1～3代细胞生物学特性相对稳定,适合软骨组织工程研究之用。