人甲型流感病毒H1N1亚型NS1蛋白的原核表达及纯化

被引：5

作者：

麻粉莲 ^{[1
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李引乾 ^{[1
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郑丽舒 ^{[2
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张骞 ^{[2
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张万菊 ^{[2
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张钫 ^{[2
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刘斌 ^{[1
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侯云德 ^{[2
]}

机构：

[1] 西北农林科技大学动物医学院

[2] 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所

来源：

中国生物制品学杂志 | 2009年 / 22卷 / 03期

关键词：

人甲型流感病毒; H1N1亚型; NS1蛋白; 原核表达; 纯化;

D O I：

10.13200/j.cjb.2009.03.18.mafl.018

中图分类号：

R373 [人体病毒学（致病病毒）];

学科分类号：

100123 [人体微生态学];

摘要：

目的表达并纯化人甲型流感病毒H1N1亚型NS1蛋白。方法用RT-PCR法从人甲型流感病毒株A/PR/8/34(H1N1)中扩增NS1基因,克隆入原核表达载体pTXB1,构建重组原核表达质粒pTXB1/NS1,经酶切鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表达形式和表达量。经几丁质柱亲和层析纯化表达蛋白,串联飞行时间质谱仪检测其相对分子质量。结果所构建的重组表达质粒pTXB1/NS1序列完整,插入的基因片段全长690bp。以1.0mmol/LIPTG37℃诱导4h,重组蛋白表达量最高,占菌体总蛋白的50%以上。破菌上清及沉淀中均有目的蛋白表达。纯化的NS1蛋白纯度达95%以上,相对分子质量约为26000。结论已成功表达并纯化了人甲型流感病毒H1N1亚型NS1蛋白,为其进一步的研究奠定了基础。

引用

页码：221 / 225

页数：5

共 8 条

[1]

Detection of Antibodies to the Nonstructural Protein (NS1) of Avian Influenza Viruses Allows Distinction between Vaccinated and Infected Chickens.[J].Siting Zhao;Meilin Jin;Hongchao Li;Yadi Tan;Guihua Wang;Ruihua Zhang;Huanchun Chen.Avian Diseases.2005, 4

[2]

Single-column purification of free recombinant proteins using a self-cleavable affinity tag derived from a protein splicing element [J].