可降解淀粉和产生酒精的酵母工程菌的构建

采用基因重组技术将黑曲酶糖化酶GAIcDNA与MF α1因子的启动子 信号序列及PGK基因的转录终止位点重组进大肠杆菌 酵母穿梭质粒构建酵母表达载体YepMGT2 0 ,用原生质体转化法引入酿酒酵母GRF1 8,在酵母MF α1启动子 信号序列及PGK终止位点的调控下 ,实现糖化酶的高表达 ,99%的酶活力分泌至胞外 ,构建的酿酒酵母GRF1 8(YEpMGT2 0 )在 1 0 %淀粉的培养基中培养 48h ,淀粉水解率达 96.1 % ;在 1 0 %淀粉的YPS培养基中发酵 96h可产生 5 .6% (v/v)的酒精 (在2 0 %淀粉培养基中酒精产量达 8.4% ) ,在无选择压力的SC培养基中培养 5d ,重组质粒的丢失率只有 1 .9%。