小鼠RelB基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定

被引：7

作者：

包杰 ^{[1
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王前 ^{[1
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郑磊 ^{[1
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曾方银 ^{[1
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刘杰 ^{[1
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熊石龙 ^{[1
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裘宇容 ^{[1
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李娟 ^{[2
]}

机构：

[1] 南方医院检验医学中心

[2] 南方医院风湿科

来源：

解放军医学杂志 | 2007年 / 06期

基金：

广东省自然科学基金;

关键词：

基因,RelB; RNA干扰; 慢病毒载体; 滴度;

D O I：

暂无

中图分类号：

R346 [];

学科分类号：

摘要：

目的构建小鼠RelB基因RNA干扰（RNAi）慢病毒载体,有效沉默骨髓树突细胞（DC）的RelB基因表达,为构建骨髓致耐受DC用于自身免疫病的防治提供研究基础。方法利用Invitrogen公司在线软件设计小鼠RelB基因（NM009046）shRNA序列,合成、退火形成dsoligo后克隆到pENTRTM/U6载体的黏性末端,测序,得到的阳性重组子再与慢病毒载体进行重组,转化stb13感受态细胞,测序鉴定,在脂质体的介导下将慢病毒的包装混合物和RelB基因重组慢病毒载体导入293FT细胞,包装成病毒后,收集病毒上清,采用系列稀释法测定病毒滴度。结果测序结果显示pENTRTM/U6-RelB-shRNA为阳性克隆,将该阳性重组载体与慢病毒载体重组,转化,氨苄青霉素抗性筛选阳性克隆,U6前引物测序鉴定,测序结果显示该重组慢病毒载体也为阳性克隆,在293FT细胞中进行病毒包装,收集上清并在-80℃贮存。系列稀释法检测病毒悬液的滴度为6×105TU/ml。结论成功构建出小鼠RelB基因shRNA慢病毒RNAi表达载体,为制备致耐受DC和研究DC在自身免疫病中的应用提供了稳定的转染细胞载体。

引用

页码：585 / 587

页数：3

共 2 条

[1] 小鼠骨髓成熟与不成熟树突状细胞中RelB基因的表达 [J].