牡丹ISSR-PCR反应体系正交优化设计

被引：18

作者：

王佳 ^{[1
]}

胡永红 ^{[2
]}

张启翔 ^{[1
]}

机构：

[1] 北京林业大学

[2] 上海植物园

来源：

安徽农业科学 | 2006年 / 24期

关键词：

牡丹; ISSR-PCR; 正交设计; 反应体系;

D O I：

10.13989/j.cnki.0517-6611.2006.24.033

中图分类号：

S685.11 [牡丹];

学科分类号：

090706 ;

摘要：

以“凤丹(”Paeonia ostii)基因组DNA为模板,采用正交试验设计方法,研究牡丹ISSR反应体系的影响因素,建立了适合牡丹的ISSR反应体系及程序。10 lμ反应体系为:1×反应缓冲液,2.5 mmo1/LMg2+,0.4 mmo1/LdNTPs,1.0 UTaq聚合酶,0.75μmol/L引物,10～20 ng模板DNA。反应程序为:94℃预变性3 min;94℃变性45 s,45～60(℃不同引物退火温度各异)复性45 s,72℃延伸90 s,35个循环;72℃延伸7 min;4℃保存。通过梯度退火试验,确定不同引物的退火温度。

引用

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