禽网状内皮组织增生症病毒囊膜糖蛋白gp90的原核表达

根据禽网状内皮组织增生症病毒 (REV) SNV株的前病毒基因组 c DNA序列 ,设计并合成 1对引物 ,以 SNV株前病毒 c DNA全基因组克隆为模板 ,通过 PCR技术 ,扩增出该病毒囊膜糖蛋白 (env) gp90基因部分片段。将 PCR产物按正确的阅读框架定向克隆进 p GEX- 5 X- 3载体中谷胱甘肽 - S-转移酶 (GST)的下游 ,将重组质粒转化进宿主菌BL2 1 中 ,在 1.0 mm ol/ L IPTG(37℃ )诱导下 ,gp90基因部分片段以融合蛋白的形式获得了良好的表达。表达产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定 ,确定其表达的融合蛋白相对分子质量为 6 40 0 0。将表达产物从凝胶中回收后免疫小鼠 ,所得的抗血清可与 REV野毒株感染的鸡胚成纤维细胞 (CEF)在免疫荧光试验中起反应。由此表明 ,体外表达的 SNV株gp90 - GST融合蛋白保留了天然蛋白所具有的抗原性。