miR-9对骨性关节炎细胞凋亡的影响及与protogenin的靶向关系

目的探讨miR-9对骨性关节炎细胞凋亡的影响及与protogenin(PRTG)的靶向关系。方法比较miR-9在正常和骨性关节炎软骨细胞中的表达情况,构建pre-miR-9、PRTG野生型(PRTG-WT)和突变型(PRTG-MT)真核表达载体,采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-9在骨性关节炎细胞中的转染效率,采用AnnexinⅤ-FITC检测过表达的miR-9对骨关节炎软骨细胞凋亡的影响,并采用双荧光素酶报告基因、qRTPCR和Western blot检测验证miR-9与PRTG的靶向关系。结果 qRT-PCR显示miR-9在关节炎细胞中的表达较正常软骨细胞明显下调(P=0.009);成功构建pc DNATM6.2-pre-miR-9、pmir GLO-PRTG-WT和pmirGLO-PRTG-MT真核表达载体,qRT-PCR显示pre-miR-9转染骨关节炎软骨细胞后miR-9的表达明显上调(P=0.003)。AnnexinⅤ-FITC检测显示miR-9过表达能够显著抑制骨关节炎细胞的凋亡率(P=0.03);双荧光素酶报告基因显示共转染pre-miR-9和PRTG-WT的关节炎软骨细胞的荧光活性明显下降(P<0.001)。此外,qRT-PCR和Western blot检测显示miR-9过表达可以显著下调PRTG的mRNA(P=0.005)和蛋白(P=0.002)表达水平。结论 miR-9过表达可能通过靶向下调PRTG的表达进而抑制骨性关节炎软骨细胞的凋亡。