一种分离提纯眼镜蛇(Naja naja atra)神经毒素的简便方法

被引:3
作者
龚潮梁
余素清
宋世廉
机构
[1] 中国科学院昆明动物研究所
关键词
眼镜蛇神经毒素; 聚丙烯酰胺凝胶; 层析; 组份; 色层分析; Naja naja atra; 眼镜蛇毒; 简便方法; 分离提纯;
D O I
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摘要
本文报导了一种分离提纯眼镜蛇神经毒素的简便方法:用pH7.8,0.01M磷酸盐缓冲液平衡的CM-纤维素柱吸附眼镜蛇毒,经平衡缓冲液洗涤后,以含不同NaCl浓度的平衡缓冲液分段洗脱。眼镜蛇神经毒素在用含0.07M NaCl的缓冲液洗脱时被洗脱下来,此组份的洗脱液合并后经70℃选择性热变性处理,冷却后离心除去变性的杂蛋白沉淀,溶液加入三倍体积的冷丙酮,得到含盐的眼镜蛇神经毒素沉淀,用Sephadex G10脱盐后冻干,即可得到纯眼镜蛇神经毒素。 此法分离提纯的眼镜蛇神经毒素,聚丙烯酰胺凝胶电泳显示出单一的区带,Sephadex G-50凝胶过滤层析出现单一的、对称的洗脱峰,与抗眼镜蛇毒血清进行免疫扩散时呈现单一的沉淀线。此神经毒素小鼠腹腔注射的LD50为1.1ug/20g体重,当浓度为1.Omg/ml时,A280nm1cm为1.07。得率约为全毒的6.5%。
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