反转录PCR技术检测贝类中诺瓦克样病毒的研究

被引：2

作者：

马晓燕 ^{[1
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张颖 ^{[2
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张伟 ^{[1
]}

桑亚新 ^{[1
]}

袁耀武 ^{[1
]}

李英军 ^{[1
]}

机构：

[1] 河北农业大学食品科技学院有害微生物检测与控制研究室

[2] 中国环境管理干部学院生态学系

来源：

中国食品学报 | 2008年 / 04期

关键词：

诺瓦克样病毒; 反转录PCR; 贝类; 检测;

D O I：

10.16429/j.1009-7848.2008.04.024

中图分类号：

R155.5 [食品卫生与检验];

学科分类号：

100403 ;

摘要：

目的:从病毒富集和核酸提取两方面进行探索,旨在建立一个反转录(RT)PCR技术检测贝类中诺瓦克样病毒(NLVs)的方法。方法:利用脊髓灰质炎病毒作为参照毒株,优化甘氨酸缓冲液-聚乙二醇(PEG)病毒浓缩方法;同时比较异硫氰酸胍法、SDS-蛋白酶K法、Trizol-异丙醇法、试剂盒法4种RNA提取方法;对市售贝类样品进行了检测,并利用基因测序对阳性样品进行验证。结果:采用pH9.5甘氨酸缓冲液-16%聚乙二醇病毒浓缩法,病毒的回收率为16.8%;利用Trizol-异丙醇法提取RNA,检出限为8.1×102RT-PCR50/5g贝肉;实际检测贝类样品25件,其中3件样品为阳性,基因测序结果亦证实为阳性。结论:建立了一个灵敏度较高的RT-PCR检测贝类中诺瓦克样病毒的方法。

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页数：9

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