龟鹿二仙胶不同提取部位对豚鼠软骨细胞活性的影响

目的:探讨龟鹿二仙胶不同提取部位对豚鼠软骨细胞活性的影响。方法:采用溶剂极性依次递增分离法分别制备龟鹿二仙胶的三氯甲烷提取物、正丁醇提取物和水提取物。然后分别以三氯甲烷提取物(烷提组)、正丁醇提取物(醇提组)和水提取物(水提组)及生理盐水(对照组)对4组Wistar大鼠进行灌胃,制备含药血清,再分别以这些含药血清对体外培养的豚鼠软骨细胞进行干预。干预结束后分别采用免疫组织化学技术、实时荧光定量聚合酶链式反应法及酶联免疫吸附法测定经4种含药血清干预后的豚鼠软骨细胞中Ⅱ型胶原蛋白、Bcl-2和Bax基因及MMP-3水平。结果:1Ⅱ型胶原蛋白水平。4组细胞Ⅱ型胶原蛋白水平比较,差异有统计学意义[(0.178±0.002),(0.188±0.003),(0.177±0.003),(0.173±0.001),F=32.905,P=0.000];对照组Ⅱ型胶原蛋白水平低于其余3组(P=0.003,P=0.000,P=0.023);醇提组高于烷提组和水提组(P=0.000,P=0.000);烷提组和水提组比较,差异无统计学意义(P=0.367)。2Bcl-2基因和Bax基因水平。4组细胞Bcl-2基因水平比较,差异有统计学意义[(0.569±0.052),(1.000±0.000),(0.636±0.072),(0.387±0.061),F=136.767,P=0.000];对照组低于其余3组(P=0.000,P=0.000,P=0.000);醇提组高于烷提组和水提组(P=0.000,P=0.000);烷提组低于水提组(P=0.045)。4组细胞Bax基因水平比较,差异有统计学意义[(1.789±0.240),(1.000±0.000),(1.374±0.226),(2.251±0.196),F=47.445,P=0.000];对照组高于其余3组(P=0.000,P=0.000,P=0.000);醇提组低于烷提组和水提组(P=0.000,P=0.003);烷提组高于水提组(P=0.000)。3基质金属蛋白酶3水平。4组细胞基质金属蛋白酶3水平比较,差异有统计学意义[(11.828±0.363)ng·mL-1,(10.685±0.317)ng·mL-1,(11.397±0.314)ng·mL-1,(13.136±0.379)ng·mL-1,F=71.401,P=0.000];对照组高于其余3组(P=0.000,P=0.000,P=0.000);醇提组低于烷提组和水提组(P=0.000,P=0.000);烷提组高于水提组(P=0.019)。结论:龟鹿二仙胶的三氯甲烷、正丁醇和水3种提取部位均能提高软骨细胞中Ⅱ型胶原和Bcl-2基因水平,降低Bax基因和基质金属蛋白酶3水平,其中以正丁醇提取部位的作用最强。