固定剂和固定时间对石蜡包埋组织RT-PCR检测病毒RNA的影响

目的　探讨固定剂及固定时间对石蜡包埋RNA病毒感染组织中RNA降解及标本病理形态学的影响。方法　取汉坦病毒 76～ 118株接种的乳鼠感染组织 ,以沉淀脱水类固定剂 10 0 %甲醇、75 %乙醇、10 0 %丙酮以及醛类固定剂 4 %的多聚甲醛磷酸缓冲液 （PFA）、10 %福尔马林共 5种固定剂 ,在室温下固定病毒感染组织 6h、12h、2 4h和 4 8h后 ,将各种方式固定后的病毒感染组织标本进行石蜡包埋 ,组织包埋块在室温下保存 1年～ 1 5年 ,然后进行切片HE染色 ,镜下观察各种固定剂对组织病理形态学的影响。各种方式固定后石蜡包埋组织中以RTPCR扩增出不同片段长度的病毒RNA及 βactinRNA序列 ,以判断各种固定方式对病毒RNA和细胞总RNA降解的影响。每种固定方法对RNA的影响是通过获得产物最大长度或对长片段扩增的可重复性及假阴性结果的多少来反映。结果　病理切片结果显示 ,经 10 %福尔马林和 4 %PFA固定的石蜡切片 ,组织结构完整清晰 ,组织经其他三种沉淀脱水类固定剂固定后有不同程度收缩 ,但不影响组织病理形态学检测 ,其中甲醇固定的收缩程度最小。从固定后石蜡包埋组织中提取RNA进行RTPCR扩增时 ,扩增的效果受固定剂类型和固定时间的影响 ,同时也受扩增的基因片段长度的影响。在可达到固定作用的前提下 ,同一固定