LPS诱导MC3T3-E1成骨细胞增殖并增加NF-κB p65蛋白的表达

目的:研究LPS-NF-κB信号通路在骨形成过程中的作用。方法:MC3T3-E1成骨细胞常规培养,待细胞融合率为80%时,分别加入100μg/L和500μg/L LPS处理6 h。流式细胞仪检测细胞周期,计算细胞DNA相对增殖指数;RT-PCR法检测LPS处理成骨细胞后NF-κB mRNA的表达;蛋白质印迹法(Western blot-ting)检测LPS处理成骨细胞后NF-κB p65蛋白的表达;细胞免疫荧光法检测LPS处理成骨细胞后NF-κB p65的核易位情况;电泳迁移率变动分析(EMSA)LPS处理MC3T3-E1细胞后NF-κB活力的变化情况。结果:100μg/L和500μg/L LPS可诱导MC3T3-E1成骨细胞增殖;LPS处理成骨细胞后NF-κB mRNA的表达与正常组比较无显著变化(P>0.05),而NF-κB p65蛋白的表达明显高于对照组(P<0.01);LPS处理成骨细胞后免疫荧光法可明显观察到NF-κB p65从细胞质转移入细胞核,且EMSA结果显示LPS处理组细胞核内NF-κB结合活性增加。结论:低浓度的LPS可促使成骨细胞增殖,此过程中并不影响NF-κB p65的基因表达水平,但能增加NF-κB p65蛋白的表达并提高细胞核内NF-κB的结合活性。