实时荧光定量PCR检测CK18对胃癌淋巴结微转移的诊断价值

[目的]建立细胞角蛋白18(CK18)实时荧光定量PCR(RTFQ-PCR)检测系统,定量检测CK18在胃癌淋巴结中的表达水平,发现淋巴结微转移,从而提高胃癌淋巴结转移诊断的阳性率。[方法]应用TaqMan探针实时荧光定量PCR方法,以CK18作为淋巴结微转移的标志基因,制备CK18表达序列的标准品,并建立标准曲线。定量检测24例病理证实无淋巴结转移的胃癌患者199枚淋巴结的CK18mRNA拷贝数。[结果]RTFQ-PCR检测CK18mRNA的95%CV值为2.38%,敏感性达10个拷贝。24例病理无淋巴结转移的胃癌患者,15例CK18mRNA阳性。阳性率为62.5%(15/24)。RTFQ-PCR检测CK18mRNA的量值水平,最小值为2.57×102,最大值1.08×108。[结论]应用RTFQ-PCR方法,以CK18作为淋巴结微转移的标志基因,可提高胃癌淋巴结转移的检出率,能够发现组织病理学检查不能发现的微转移灶,并可能对微转移分级有益。