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免疫学常用实验方法.[M].朱立平;陈学清主编;.人民军医出版社.2000,
重组人HMGN2多克隆抗体的制备及应用
被引：2
作者：
熊文碧
冯云
王国兴
黄宁
吴琦
李绚
王伯瑶
机构：
[1] 四川大学华西基础医学与法医学院感染免疫研究室,四川大学华西基础医学与法医学院感染免疫研究室,四川大学华西基础医学与法医学院感染免疫研究室,四川大学华西基础医学与法医学院感染免疫研究室,四川大学华西基础医学与法医学院感染免疫研究室,四川大学华西基础医学与法医学院感染免疫研究室,四川大学华西基础医学与法医学院感染免疫研究室(成都),(成都),(成都),(成都),(成都),(成都),(成都)
来源：
关键词：
高迁移率非组蛋白N2;
原核表达;
多克隆抗体;
单核吞噬细胞;
亚细胞定位;
D O I：
暂无
中图分类号：
R392.1 [免疫生物学];
学科分类号：
100102 ;
摘要：
目的制备人高迁移率非组蛋白N2(HMGN2)多克隆抗体,并用于HMGN2的亚细胞定位分析。方法提取人淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)总RNA,应用RT-PCR从其总RNA中分离HMGN2cDNA,以pGEX-1λT为载体,构建HMGN2基因大肠杆菌表达载体。应用GST亲合层析柱分离GST-HMGN2融合蛋白,将此融合蛋白免疫新西兰兔,获得抗血清经正辛酸-硫酸铵分步沉淀法初步纯化。用ELISA法检测HMGN2抗体,免疫细胞化学染色法分析HMGN2的亚细胞分布。结果经酶切产物电泳分析和DNA序列测定证明成功构建出HMGN2基因重组原核表达载体pGEX-1λT-HMGN2。转化大肠杆菌经异丙基-b-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后获得相对分子质量约35×103的GST-HMGN2融合蛋白。该融合蛋白免疫所得免疫血清经ELISA检测显示获得滴度为1∶2000的较高效价的兔抗人HMGN2多克隆抗体。并应用此抗体对THP-1细胞进行的免疫细胞化学染色显示,经LPS刺激后除细胞核外,胞浆亦明显着色。而且用ELISA法在细胞培养液亦检测到HMGN2。结论本实验成功制备出HMGN2特异多克隆抗体,免疫细胞化学分析初步证明在LPS刺激下HMGN2不仅分布于单核吞噬细胞核,还分布于细胞浆,并可释放到细胞外。
引用
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