小鼠RAPD-PCR反应体系及扩增程序的筛选

目的：筛选优化小鼠ＲＡＰＤ－ＰＣＲ反应体系及扩增程序。方法：以４０条引物对９个品系的小鼠基因组ＤＮＡ在各种不同条件下进行ＲＡＰＤ－ＰＣＲ，分析比较扩增结果。结果：在下列反应体系及扩增程序下结果较好：在２５μｌ的反应体系中含有１０×ｂｕｆｅｒ２．５μｌ，ｄＮＴＰ２００μｍｏｌ／Ｌ，Ｍｇ２＋２．５ｍｍｏｌ／Ｌ，引物０．２μｍｏｌ／Ｌ，Ｔａｑ酶１．５Ｕ，模板ＤＮＡ２０ｎｇ，扩增程序为９４℃变性１ｍｉｎ，３８℃退火１ｍｉｎ，７２℃延伸２ｍｉｎ，４０个循环后接１０ｍｉｎ延伸。结论：以上述反应体系及扩增程序进行小鼠ＲＡＰＤ－ＰＣＲ，扩增结果稳定。