油菜农杆菌转基因体系的建立及转PEP反义基因油菜的获得

本研究建立了油菜农杆菌转基因技术体系，用根癌农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）共培养法将ＰＥＰ反义基因导入甘蓝型油菜（ＢｒａｓｉｃａｎａｐｕｓＬ．）主栽品种浙油７５８和浙优油１号，获得高含油量的油菜植株。实验所用外植体为培养８～１０ｄ的无菌苗下胚轴；农杆菌为ＥＨＡ１０１（含ＡｎｔｉＰＥＰ／ＰＩＧ１２１），外植体经农杆菌感染后共培养２ｄ，转入含５００ｍｇ／Ｌ羧青霉素的ＭＳ培养基上，１周后转入含羧青霉素及潮霉素的培养基上，以后每２周继代一次至出现抗性芽，转化频率为２７５％（浙优油１号）；分化的茎芽在含相同抗生素的生根培养基中生根并长成完整小植株，转入土壤成为正常植株。经ＧＵＳ组织化学染色及ＰＣＲ扩增检测，证明外源基因已插入油菜基因组并得到表达。