抗猪圆环病毒Ⅲ型ORF2蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

利用本室构建的质粒PGEX-ORF 2转化BL 21(DE3),经IPTG诱导表达,得到PCV 2-ORF 2的重组蛋白,经复性纯化后作为免疫原,采取常规免疫与体外脾脏免疫结合的方式免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0的骨髓瘤细胞融合,经间接酶联免疫吸附试验(EL ISA)筛选,获得了2株抗PCV 2-ORF 2蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为3B 2F 4和9C 3D 2,其细胞培养上清效价分别为1∶1 024、1∶512,小鼠腹水效价分别为1∶204 800、1∶102 400。EL ISA结果显示,3B 2F 4和9C 3D 2仅与融合表达的PCV 2-ORF 2蛋白反应,而与PGEX-KG表达的蛋白、猪细小病毒(PPV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)不反应,说明此2株单抗特异性好。间接免疫荧光结果显示,3B 2F 4和9C 3D 2能与PCV 2发生反应,而不与PCV 1发生交叉反应,表明所获得的2株单抗是PCV 2型特异性的。这2株单抗的获得为进一步研究PCV 2-ORF 2基因的功能,及建立准确快速的鉴别PCV 1和PCV 2的诊断方法提供了强有力的手段。